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      堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒說明書

      提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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      詳細介紹

      堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒說明書

      注意:正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。

      規格100T/48S 產品內容:

      提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

      試劑三:液體 15mL×1 瓶,4℃避光保存,變成藍綠色不能使用。

      標準品:液體 1mL×1 支,2μmol/mL 酚標準液,4℃保存。

      產品說明:

      AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。

      AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

      在堿性環境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰HUA鉀反應紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測定 510 nm 吸光度增加速率,來計算 AKP 活性。試驗中所需的儀器和試劑:

      可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。

      操作步驟:

      一、粗酶液提?。?/span>

      稱取約 0.1g 組織,加提取液 1mL 充分研磨,4℃、10000rpm 離心 10min,取上清液待測。血液可直接用于測定,或者適當稀釋后用于測定。

      二、測定步驟:

      1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長到 510 nm,蒸餾水調零。

      2. 試劑二置于 37℃水浴中預熱 30 min 以上。

      試劑名稱(μL

      測定管

      對照管

      空白管

      標準管

      蒸餾水

      -

      -

      4

      -

      2μmol/mL 標準品

      -

      -

      -

      4

      上清液

      4

      -

      -

      -

      試劑一

      40

      40

      40

      40

      試劑二

      40

      40

      40

      40

      混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min

      試劑三

      120

      120

      120

      120

      上清液

      -

      4

      -

      -

      混勻后于 510 nm 測定吸光度,分別記為 A 測定管、A 對照管、A 空白管、A 標準管。

      www.yanjinbio.com 上海研謹生物科技有限公司

      yanjinbio@163.com 服務熱線:400-665-0203

      本產品僅供科學研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途!


      三、AKP/ALP 活性計算:

      1. 按蛋白濃度計算

      活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。

      AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V ]÷(Cpr×V )÷T

      =0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr

      2. 按樣本鮮重計算

      活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。

      AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V ] ÷(W÷V 提取×V )÷T=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W

      3. 按液體體積計算

      活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μmol 酚為一個酶活力單位。

      AKP/ALP (U/mL)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V ] ÷V ÷T

      =0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)

      C 標準品:2μmol/mL;V 反總:反應體系總體積mL),204μL=0.204mL; V 樣:加入反應體系中上清液體積mL),0.004mL;T:反應時間(min),15 min;V 提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL; W:樣本鮮重,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。

      注意事項:

      1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。

      2、 試劑三變藍綠色后不能再使用。

      3、 加入試劑三后必須立即混勻,否則顯色不完全。

      2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務,協助客戶各類實驗服務及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

      如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯系。

       

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